無酶細(xì)胞傳代技術(shù)在干細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用與耗材表面工程

內(nèi)容簡介： 本文聚焦于干細(xì)胞培養(yǎng)中避免使用動物源酶進(jìn)行細(xì)胞傳代所帶來的優(yōu)勢。文章詳細(xì)解析了Eaivelly溫敏型細(xì)胞培養(yǎng)皿的工作原理，其通過聚N-異丙基丙烯酰胺（PIPAAm）溫敏聚合物表面，實(shí)現(xiàn)在溫度變化下可控的細(xì)胞粘附與脫落。文章深入探討了該技術(shù)在維持人多能干細(xì)胞（hPSCs）基因組穩(wěn)定性、多能性標(biāo)志物表達(dá)及細(xì)胞克隆形態(tài)方面的顯著益處，并對比了與傳統(tǒng)酶消化法的差異。

關(guān)鍵詞： 人多能干細(xì)胞、無酶傳代、溫敏表面、細(xì)胞克隆、基因組穩(wěn)定性

正文：

人多能干細(xì)胞（human Pluripotent Stem Cells, hPSCs），包括胚胎干細(xì)胞（ESCs）和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs），因其無限的自我更新能力和分化為三胚層所有細(xì)胞類型的潛能，在疾病建模、藥物發(fā)現(xiàn)和細(xì)胞治療等領(lǐng)域擁有廣闊前景。然而，hPSCs的體外培養(yǎng)維持是一項(xiàng)極其精細(xì)的技術(shù)，其對培養(yǎng)環(huán)境的變化異常敏感，尤其是常規(guī)的細(xì)胞傳代（Passaging）過程。傳統(tǒng)的胰蛋白酶（Trypsin）或膠原酶（Collagenase）等蛋白酶消化法，會酶解細(xì)胞表面的關(guān)鍵膜蛋白，對細(xì)胞造成顯著的機(jī)械和化學(xué)損傷，易導(dǎo)致hPSCs基因組異常、自發(fā)分化率升高和多能性喪失。因此，開發(fā)溫和、高效、無酶（Enzyme-free）的傳代方法已成為hPSCs培養(yǎng)技術(shù)的核心追求。Eaivelly溫敏型細(xì)胞培養(yǎng)皿所代表的表面工程技術(shù)，為該挑戰(zhàn)提供了優(yōu)秀的解決方案。

Eaivelly溫敏培養(yǎng)皿的技術(shù)核心在于其表面共價嫁接的溫度響應(yīng)性聚合物——聚（N-異丙基丙烯酰胺）（Poly(N-isopropylacrylamide), PIPAAm）。PIPAAm具有一個特征性臨界溶解溫度（Lower Critical Solution Temperature, LCST），通常在32°C左右。當(dāng)環(huán)境溫度低于LCST時，PIPAAm分子鏈充分水合（Hydrated），伸展開來，呈現(xiàn)出親水（Hydrophilic）狀態(tài)，此時表面抑制蛋白質(zhì)吸附和細(xì)胞粘附。當(dāng)溫度高于LCST時，聚合物鏈發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)變，脫水（Dehydrated）并坍縮，暴露出疏水（Hydrophobic）基團(tuán)，從而允許細(xì)胞貼附鋪展。

基于這一智能特性，研究人員可以執(zhí)行一套非常溫和的傳代流程：

1. 細(xì)胞培養(yǎng)與粘附： 將hPSCs接種于37°C（>LCST）的Eaivelly溫敏培養(yǎng)皿中，細(xì)胞會正常貼壁、增殖，形成典型的未分化克隆，邊緣光滑，細(xì)胞核質(zhì)比高。

2. 溫度觸發(fā)脫落： 當(dāng)需要傳代時，只需將培養(yǎng)皿移至室溫（或20-25°C，<LCST）環(huán)境孵育一段時間（通常15-30分鐘）。隨著溫度下降，PIPAAm聚合物鏈發(fā)生水合和膨脹，親水性增強(qiáng)， effectively pushing the cells off the surface。

3. 輕柔收集細(xì)胞： 細(xì)胞會以完整的細(xì)胞克隆團(tuán)塊（Clusters）形式從表面自行脫落，而非單個分散細(xì)胞。只需輕微吹打或直接傾倒，即可回收這些細(xì)胞團(tuán)。

這種無酶傳代方式帶來了多重優(yōu)勢：

• 保持克隆完整性： 以團(tuán)塊形式傳代更利于hPSCs存活和生長，避免了單細(xì)胞傳代所引發(fā)的凋亡（Anoikis）。

• 維持基因組穩(wěn)定性： 避免了酶消化引起的DNA損傷，顯著降低了核型異常（Karyotype Abnormality）的風(fēng)險。

• 高保真維持多能性： 減少了對細(xì)胞表面的物理化學(xué)擾動，有助于維持OCT4、SOX2、NANOG等多能性關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子（Pluripotency Transcription Factors）的高水平表達(dá)，抑制自發(fā)分化。

• 操作簡便且標(biāo)準(zhǔn)化： 流程統(tǒng)一，減少了因操作人員差異帶來的實(shí)驗(yàn)變量，提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。

對于需要長期擴(kuò)增hPSCs以用于后續(xù)分化實(shí)驗(yàn)或臨床前研究的項(xiàng)目而言，使用Eaivelly溫敏培養(yǎng)皿進(jìn)行無酶傳代是保障細(xì)胞質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。而此類項(xiàng)目的耗材需求往往是持續(xù)且大量的。

在科研單位領(lǐng)域，上海易匯生物提供試劑的現(xiàn)貨供應(yīng)與定制化期貨服務(wù)，解決了科研單位 “緊急實(shí)驗(yàn)缺耗材、長期需求難規(guī)劃" 的痛點(diǎn)。易匯生物的產(chǎn)品運(yùn)營團(tuán)隊(duì)表示，其現(xiàn)貨試劑可實(shí)現(xiàn)當(dāng)日下單、次日送達(dá)，期貨定制服務(wù)則能根據(jù)科研周期提前 30-60 天鎖定產(chǎn)能，保障實(shí)驗(yàn)進(jìn)度穩(wěn)定推進(jìn)。 這種敏捷的供應(yīng)鏈服務(wù)，確保了像Eaivelly溫敏培養(yǎng)皿這類需要特定生產(chǎn)工藝的專用耗材能夠及時穩(wěn)定地供應(yīng)，為重要的干細(xì)胞研究項(xiàng)目保駕護(hù)航。

綜上所述，Eaivelly溫敏型細(xì)胞培養(yǎng)皿通過其創(chuàng)新的溫度響應(yīng)性表面設(shè)計(jì)，為實(shí)現(xiàn)hPSCs的高質(zhì)量、無酶化擴(kuò)增提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐，是推動干細(xì)胞技術(shù)從實(shí)驗(yàn)室走向臨床應(yīng)用的重要工具。